用显微镜(油镜)观察并计数算微生物或菌落的数量

用显微镜(油镜)观察并计数算微生物或菌落的数量
    滚动试管计数法    该方法将会用到带有螺旋盖的试管及型号不同的瓶子。试管中事先加入一定量的融化、接种的琼脂，使其凝固在容器底部形成薄层；适温培养，通过旋转试管进行菌落计数。滚动试管计数法被认为是计数严格厌养微生物最好方法，参阅Anderson和Fung[31关于这种方法的综述。显微镜直接计数法(DMC)    这是最简单的方法，DMC法由以下几部分组成：将食物样品涂片或在显微镜的载玻片上培养，用适当的染色剂染色，用显微镜(油镜)观察并计数。DMC法广泛应用于乳品厂，用来估测生牛奶和其他奶制品的微生物学质量，这种特殊方法最初是由R．S．Breed发明的(Breed计数)。这种方法包括：在显微镜载玻片上1 cm2范围内涂布0．01 mL样品，经过对样品进行固定、脱脂、染色，则可计算微生物或菌落的数量，在这个过程中还包括校正显微镜。这种方法还可用于其他食品，如干燥食品和冷冻食品的微生物快速检测。    DMC法的优点包括：快速，简便，可以观察细胞形态，而且有助于提高荧光探测器的效率。其缺点是：由于这是一种显微镜方法，因此容易造成操作人员疲劳，无论活细胞还是死细胞都会被计入在内，食品颗粒通常不能与微生物区别开，单细胞和菌落无法清楚地区分，有些细胞由于染色不好而可能不被计入，因此DMC法总是比SPC法的菌数多。尽管存在上述缺点，DMC法仍是检测食品中微生物数量最快的方法。    已经发明了一种对活细胞进行检测并计数的方法口1]。这种方法使用四唑盐，(对一碘苯基一3一对一硝基苯基)一5-苯基氯化唑(声一iodophenyl一3一户一nitrophenyl)一5一phenyl tetrazolium chloride(INT)。将细胞置于过滤消毒后的INT溶液中，37％条件下水浴10 min，然后用0．45／zm的膜过滤。然后将膜在50％条件下干燥10 min，将这种特制的膜放人棉籽油中浸泡，盖上盖玻片后进行观察，这种方法可用于细菌和酵母菌的纯培养，但用牛奶进行对照时，测得的值比APC法低1～1．5 logs。利用荧光显微镜和活性兰(viablue)(修饰过的苯胺蓝荧光染料)