食品微生物学实验室检测-微生物鉴定显微镜

食品微生物学实验室检测-微生物鉴定显微镜
    对许多食品微生物学实验室而言，这些检测方法要求的技术较复杂。除此之外，还有两个问题需要解决:一个是PCR反应的抑制剂;另一个是如何区分活细胞与死细胞。食品中存在很多酶、蛋白质和其他化合物，它们可能干扰PCR反应从而导致假阴性结果。这些抑制剂必须被清除或稀释。既然PCR反应能扩增目标DNA，那么来自死细胞的DNA也可以被扩增，因此含有沙门菌死细胞的食品也能检出沙门菌阳性结果。在这种情况下，烹饪过的但仍然含有沙门菌死细胞DNA的食物就没有必要因为阳性的PCR检测结果而被销毁。一旦所有这些问题得以解决，PCR技术可以成为食品中微生物检测的一种非常有效的手段，如此，分析人员就能在常规食品分析中采用该技术。    上述遗传检测方法可用于检测食品和其他样品中的目标病原菌，但不能将微生物鉴定到种或亚种水平，而这种鉴定结果在突发的流行病学研究和常规的环境微生物检测中是非常重要的。下面重点讨论细菌的遗传分类学进展。    RiboPrinter微生物鉴定系统(DuPont Qualicon, Wilmington, DE)可以自动地将微生物鉴定到属、种、亚种的水平。为了得到一个微生物的RiboPrint分析结果，需进行如下步骤。    (1)使用无菌塑料棒从琼脂平板上挑取可疑目标微生物(如沙门菌)的单菌落。    (2)通过机械搅拌使塑料棒上的细胞重悬于缓冲溶液中。    (3)取出一份细胞悬液加人载样台，将其放置于仪器中。每个载样台可同时容纳8个菌落样品。    (4)仪器使用裂解液和限制性内切酶裂解细胞，释放细胞内容物并切断DNA分子。DNA片段通过凝胶电泳分离成若千条带。接着，DNA探针与目标DNA片段杂交，杂交片段产生的荧光被拍摄下来。该数据保存后会与已知微生物样品的数据进行比较。对于8个样品的处理过程约需8h。但实验结束2h后，即可对新一轮的8个样品进行分析。