各种化合物的柱层析分离是生化工作中使用最广泛的技术

各种化合物的柱层析分离是生化工作中使用最广泛的技术
层 析
柱层析的实践
各种化合物的柱层析分离是生化工作中使用最广泛的技术之一。在论述各种类型的柱层析方法之前，先考虑柱子的 准备和操作中的一般注意事项。
柱子 层析柱一般是玻璃的。长柱的分辨率通常较 高，然而投料量大时用粗柱更好。
材料备 用于层析分离的材料很多，装柱之前，都要 和溶剂平衡。此外，常常还需要做一些预处理，如一些凝胶过 滤的材料需要膨胀，吸附剂需要加热或酸处理活化，离子交换 树脂必须用洗涤法转变成为需要的离子型。
和溶剂平衡期间，让装柱的材料沉降，用倾析法除掉悬液 中漂浮的细小颗粒 不去掉这种细小颗粒,它们
就会堵住柱中的空隙，显著减小溶剂的流速。
分部收集和分析 用手工，或更普遍地是用自动分部 收集器将来自柱子的流出液收集在一系列试管里。该收集器 将预定体积或滴数的流出液收集到一支试管里，然后移开这 支试管，换上另一支试管。分析毎一组分中所研究的化合物， 画出洗脱的化合物的S对流出液体积的洗脱图形。让流出液 连续通过一个流动比色池，测量在280毫微米或260毫澉米 的光吸收，便能监测每一组分中蛋白质或核酸的含量。
斑点的检出 许多化合物是无色的，要用特殊的试剂 呈色。施加呈色试剂的办法，是将呈色试剂喷在滤纸上，或将 滤纸在用挥发性溶剂配制的呈色试剂里面快速浸一下。在紫 外光下面观察层析图谱也是有用的，因为某些化合物强烈吸 收紫外光，在紫外光照射下滤纸发生荧光，而该化合物呈黑 色。另外，一些化合物在紫外光下呈现特征性的荧光。